NÓTESE BIEN. Estos métodos se han desarrollado para su uso con muestras cuantitativas montados pre-existentes y el estudio de la variación latitudinal en el tamaño corporal.
Selección de especies para el análisis:
- Las especies deben tener una amplia distribución latitudinal, al menos 10 grados de latitud.
- Las especies deben ser lo suficientemente abundante en al menos tres sitios a través de su gama.
- Suficientemente abundantes se define como mínimo de 10 individuos adultos. Sin embargo, lo ideal debería ser de 20 individuos adultos de 10 machos y 10 hembras permitiendo que las diferencias entre los sexos a ser examinado.
Posibles problemas prácticos al revisar las muestras cuantitativas que pueden impedir que se obtuvieron medidas eficientes:
- La mayoría de los individuos presentes son juveniles. Tanto los machos como las hembras normalmente se pueden distinguir por la presencia de estructuras copulatorios desarrollados, espículas en los machos, la vulva en las hembras, y la presencia de gónadas.
- Los individuos están demasiado distorsionados por la formalina para realizar mediciones prácticas. Algunas especies bobina fuertemente en respuesta a la formalina, esto hace que sea difícil conocer la vía del cuerpo y para determinar las posiciones de las estructuras de copulación, el ano, y el esófago.
- Mala orientación. De vez en cuando el cuerpo del nematodo es en parte orientada verticalmente y mediciones precisas son imposible.
- Parte del cuerpo está oscurecido. En cumplimiento con la ley de Murphy, parte del cuerpo del individuo es oscurecida por otro organismo, material orgánico o un grano de arena.
Los problemas descritos anteriormente indican que en muchos casos, a pesar de ser una especie abundante, con una amplia distribución, resulta difícil de adquirir suficientes mediciones para análisis estadísticos válidos.
Métodos de medición:
Las mediciones pueden ser obtenidas usando un tubo dibujo adjunto a un microscopio compuesto. Estos dibujos deben realizarse con el máximo aumento posible en que la muestra completa se queda en el campo de visión. En casos extremos, donde el nematodo es muy larga y delgada, tendrá que ser hecha con un aumento superior a la utilizada para medir la longitud de las mediciones del ancho. Los dibujos son preferibles a las fotografías debido a la poca profundidad del campo de la imagen. El enfoque se puede ajustar de forma continua durante el proceso de dibujo y asegurar representación exacta de la muestra. Los nuevos desarrollos en la manipulación de imágenes significan que podría ser posible obtener el mismo efecto mediante la combinación de varias fotos, efectivamente múltiples transectos través de la muestra, pero esto es claramente mucho más tiempo y no tengo idea de si sería eficaz.
- La longitud del cuerpo del individuo seleccionada se traza con la ayuda de un tubo de dibujo.
- El ancho máximo del cuerpo está trazado.
- La posición del ano está marcado.
- La posición del extremo posterior del esófago está marcado.
- La posición de la spicula en los machos está marcada (misma ubicación que el ano).
- La posición de la vulva en las hembras está marcada.
- El dibujo se le da un número de identificación y se indica el sexo.
- Las mediciones pueden ser hechas, con referencia a una escala calibrada, utilizando un medidor de mapas o mediante el escaneo de los dibujos y el uso de software.
- Ratios de De Man se calculan junto con V%.
Análisis utilizando Inkscape (Open Source – Linux / Windows / Mac):
- Abra el dibujo escaneado en Inkscape.
- Zoom para alrededor de 100% o más, dependiendo del tamaño del nematodo.
- Seleccione “Dibujar líneas a mano alzada” (F6) de la caja de herramientas de la parte izquierda.
- Establecer Smoothing al 50% (superior izquierda).
- Seleccione la extensión Medida de Camino (Extensiones> Visualizar Ruta> Medir el camino).
- Utilice los siguientes parámetros: el tipo de medición = longitud, tamaño de fuente = 8, Offset = -7.0, Precisión = 2, factor de escala = 1, unidad de longitud = px.
- Estos valores son los que utilizo como ‘defecto’ pero se pueden ajustar según sea necesario, por ejemplo, hacer que el tamaño de letra más pequeño de líneas cortas de modo que la visualización de la medida no se corta.
- Trazar sobre las líneas utilizando el cursor. Esto se puede hacer con un ratón, pero es más fácil con una tableta gráfica. ¡Si la línea trazada se aleja demasiado del original hacerlo de nuevo!
- Pulse el botón “Aplicar” en el diálogo Medida Camino, y la medida en px (píxeles) será colocado adyacente a la línea.
- Antes de pasar a la siguiente medición asegurar que sea legible, las cifras se asignan a la curva de la línea, si las cifras se comprimen en el interior de una curva tratar trazando la línea desde el extremo opuesto por lo que las cifras están en el exterior de la curva. Cambiar el tamaño de la fuente también puede ayudar. Configuración de suavizado al 50% también ayuda a asegurar que los datos sean legibles.
- La calibración se puede conseguir usando dibujos de un micrómetro de la platina en las mismas aumentos.
- Guarde el archivo como un SVG para su posterior análisis.
[Traducción sin correciones]