Esta información sobre el tratamiento de muestras has sido proporcionada por el Proyeto Darwin Nematode, sitio mantenido por el Plymouth Marine Labs, Reino Unido (con la autorización correspondiente).
Las muestras de sedimento fijadas, además de la fauna, contienen una mezcla de formalina y componentes de sedimento como cieno, arcilla, granos de arena y detrito orgánico. Aunque los siguientes métodos son con frecuencia referidos como ‘extracción de fauna’, en realidad lo que pretendemos es sacar los multiples componentes del sedimento, y así terminar solamente con la fauna de la muestra original.
Suministro de agua libre de meiofauna: Antes de procesar las muestras es muy importante asegurarse que la fuente de agua dulce con la que se dispone en el laboratorio no contenga meiofauna. Para conseguir esto, escurra el agua dulce por un tamiz de 63 µm por 5-10 minutos y verifique el contenido retenido en el tamiz con la ayuda de una lupa binocular. Si registra meiofauna en el tamiz, es necesario que procure removerla. Muchas de las siguientes técnicas involucran lavando y concentrando la meiofauna en tamices con agua dulce. Se recomienda fijar una manguera flexible a la llave del lavatorio, esto le permitirá aumentar el control sobre la dirección y fuerza del flujo. Debido a que la meiofauna es pequeña, se recomienda no usar un chorro fuerte de agua para evitar con ello el salpicado de las muestras.
1 Sacando cieno/arcilla y fragmentos grandes
El primer lavando de la muestra con agua dulce y sobre una tamiz de 63 µm elimina los componentes de sedimento fino, cieno y arcilla, y gran parte de la formalina. Tenga cuidado de no sobrecargar el tamiz, muestras grandes y fangosas pueden requerir ser tamizadas en cantidades pequeñas. ‘Puddling’ puede ser útil si el tamiz se satura. Siga lavando hasta que el agua que pasa por el tamiz salga relativamente transparente. Para algunos sedimentos finos, especialmente si las muestras iniciales son pequeñas, este procedimiento es suficiente para reducir la muestra hasta una cantidad que puede ser extraído con Ludox (ver sección 4)
Algunos tipos de muestras pueden contener cantidades significativa de materiales como hojas o fragmentos de papel. En tales circunstancias, será útil remover este material lavando la muestra en una tamiz de 1 mm posicionado sobre el tamiz de 63 µm. Se requiere mucho cuidado para no obstruir el tamiz de trama mas pequeña porque este no es no puede verse directamente a simple vista. El contenidos de la tamiz 1 mm debe ser explorado bajo una lupa binocular para asegura que todo la meiofauna haya sido removida.
2 Decantación
Si después de lavado inicial, la muestra aún contiene apreciables cantidades de arena, esta puede ser removida por decantación. Lave la muestra que queda en una probeta de 1 litro, con boca ancha y tapa (no intente con más de 150 ml de sedimento cada vez) y llene la probeta con agua dulce. Tape la probeta y vigorosamente agite e invierta la probeta 5-10 veces para distribuir el sedimento uniformemente en el volumen. Brevemente pare la probeta, probablemente por no mas de 5 segundos, hasta que la mayoría del material mas denso (principalmente arena) precipite, y entonces vierta cuidadosamente el liquido sobrante sobre una tamiz de 63 µm. Repetir 3-6 veces. Como el próximo proceso es la extracción con Ludox (ver sección 4), no se preocupe si hay un poco sedimento fino en el tamiz de 63 µm. Es una buena práctica chequear por meiofauna en una muestra del sedimento que queda en la probeta antes de descartarlo. Esto es particularmente importante si la muestra es una de las primeras muestras que se procesan de una nueva investigación.
3 Preparación del Ludox
El objetivo de la extracción por flotación es suspender la fauna un fluido que tiene un peso específico muy cercano al de la fauna, de este modo la fauna que es neutralmente flotante permanecerán flotando y pero los sedimentos que son negativamente boyante y se hundirán. En el pasado, una variedad de fluidos densos han sido usados para extraer fauna de sedimento. La desventaja de la mayoría de estos fluidos, como NaCl o sucrosa, es que estos poseen un potencial osmótico muy alto y por eso pueden provocar daños en parta de la fauna. Ludox es una solución de sílice coloidal, principalmente desarrollada parar uso en fundiciones de hierro, con propiedades que la hacen ideal para la extracción de meiofauna. Ludox esta disponible en un rango de grados, pero Ludox TM es el tipo mas ampliamente usado. El Ludox TM comercializado tiene un peso específico de 1.13 a 1.14. El peso específico requerido para la extracción de meiofauna es aproximadamente 1.15, por lo tanto la solución estándar debe ser diluida. Agregando dos partes de Ludox por tres partes de agua dulce producirán una solución con una densidad aproximadamente correcta, pero la densidad debe ser medida con un densímetro. No use agua de mar directamente con Ludox, debido a que esto causará precipitación de silicio, desperdiciando la muestra inútil.
Ludox es una solución de sílice coloidal. Pequeños derrames pueden secarse y transformarse en sílice, el cual es nocivo. Los derrames deben ser fregados y limpiados inmediatamente y cuidado debe ser tomado cuando se use Ludox. Tamices, cristalería, y otros equipos como picetas, que han sido usadas con Ludox deben ser empapados en una solución diluida de NaOH y luego enjuagados con agua caliente.
4 Flotación con Ludox
Numerosas técnicas de centrifugación que involucran Ludox ha sido usadas, sin embargo el siguiente método ha sido considerado sencillo y eficaz. Después de la decantación, o si después del lavado inicial la muestra contiene una pequeña cantidad de material, movilice con el lavado cuidadosamente la porción extraída de sedimento a un lado del tamiz, y luego utilizando Ludox deposítelo en un baso de precipitado alto. Agregue Ludox en un volumen por lo menos 10 veces el volumen de la muestra, hasta un peso especifico de 1.15. Revuelva con vigor para distribuir la muestra uniformemente por todo el volumen y deje sedimentar por al menos 40 minutos hasta que aparezca una clara separación entre la meiofauna flotante por arriba del Ludox y el sedimento al fundo de la baso de precipitado. Algunas partículas finas de arcilla puede permanecen en la muestra incluso después del lavando y la decantación y estas van a permanecer en suspensión aun después de algunas horas. Ellos deben ser ignorados debido a que ellos pasaran por el tamiz de 63 µm. Cuidadosamente vierta el sobrante líquido a través de un tamiz de 63 µm hasta una jarra. Devuelva la Ludox a la muestra y repita el proceso de flotación 2 a 4 veces más. Puede ser necesario chequear que el peso específico del Ludox no haya sido modificado por el agua presente en la muestra de sedimento después del primer lavado, si es necesario agregue mas Ludox concentrado para retornar al peso específico a 1.15. Después de cada flotación lave la fauna extraída con agua dulce. Si no quiere trabajar inmediatamente con la muestra, consérvela en un envase apropiado de vidrio y tapa plástica en una solución de alcohol al 70% con glicerina al 5% glicerina o formalina al 4%.